Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

マウスプロリルエンドペプチダーゼは、N末側とC末側のペプチダーゼドメイン、並びに中間のプロペラードメインから構成されている。この蛋白質をコードするマウスプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子は、15のエクソンから構成されている。この内、エクソン6は、プロペラードメインを構成するペプチドをコードする。エクソン6の遺伝子欠損マウスの作出を試みた。まず、129系統のマウスのゲノムライブラリーより、プロリルエンドペプチダーゼ遺伝子をクローニングした。得られたゲノムDNAを元に、エクソン6にネオマイシン耐性遺伝子を置換したターゲティングベクターを構築した。エレクトロポーレーション法を用いて、ターゲティングベクターをマウスES細胞に導入し、相同組み換えにより、ES細胞ゲノム上のプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子が破壊されたES細胞を樹立した。さらに、このES細胞を用いて、キメラマウスを作出した。現在、作出したキメラマウスからES由来のF1マウスが誕生するかについて調べている。またプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子の両アリルを破壊したES細胞の樹立が可能であるかに付いて検討した結果、両アリルを破壊したES細胞の樹立が可能であった。得られたES細胞では、プロリルエンドペプチダーゼ酵素活性は全く検出されなかった。また、得られたプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子欠損のES細胞の増殖は、野生型ESと同程度であった。この結果は、本遺伝子がES細胞の増殖には不必要であることを初めて示した結果である。