【研究分野】生体関連化学

【研究領域課題番号】15K13750 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

プロテオーム / 質量分析 / プロテオミクス

【研究成果の概要】

細胞の機能を調節している転写因子などの重要なタンパク質のおおくは、細胞内で微量にしか発現していないことが多く、これらを質量分析によって検出することは困難であった。そこで、無細胞翻訳系を用いた簡便な同位体標識標準ペプチドと、静電相互作用、疎水性相互作用を用いたクロマトグラフィーによる多次元の分離により、標的タンパク質フラグメントの純度を高めることで、微量タンパク質の高感度な絶対定量法であるMS-QBiC法を確立した。これにより１細胞内に数千分子しか存在しない概日時計の転写因子の増減を定量的に検出することに成功した。

【研究種目】挑戦的萌芽研究

【研究期間】2015-04-01 - 2017-03-31

【配分額】3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)

【研究分野】医化学一般

【研究領域課題番号】23659150 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

加齢医学 / 老化 / アミロイド / 疾患モデル動物 / 質量分析 / 蛋白質 / プロテオーム解析 / 凝集体 / アミロイドーシス / タンパク質 / 恒常性 / プロテオーム / マウス / ApoA-II

【研究成果の概要】

若齢から老齢に至るマウスからアミロイド線維／凝集体を分取し、網羅的プロテオーム解析を行った。 マウスを２ヶ月齡～28ヶ月齡で屠殺し、肝臓、脳、心臓及び筋肉を採取した。またマウスにアミロイド線維を投与しアミロイドーシスを誘発して4～10ヶ月後に臓器を採取した。これらの臓器よりアミロイド線維／凝集体を分取し、LC/MS/MSシステムで蛋白質の網羅的同定と定量を行った。
1. 老齢マウス脳で有意に増加する凝集体蛋白質は全部で40 種同定された。
2. アミロイドの肝臓への沈着に伴い出現するアミロイド線維以外の蛋白質を同定した（ApoE， Clusterin，Vitronectinなど）。

【研究種目】挑戦的萌芽研究

【研究期間】2011 - 2013

【配分額】3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円)

【研究分野】産婦人科学

【研究領域課題番号】15591777 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

ヒト / 精子 / プロテオーム / タンパク質リン酸化 / 凍結保存 / 糖タンパク / 質量分析 / アミノ酸配列解析

【研究成果の概要】

本研究ではヒト精子に発現する全タンパクのプロファイリングに加え、レクチンを用いた糖タンパクの解析、凍結保存の影響、不妊との関連、そして精子機能とリン酸化の関連を検討した。ヒト、およびマウス精子膜抽出タンパクよりヒトでは560個、マウスでは318個の独立したスポットを認め、各々118個、94個についてタンパク質の同定が可能であった。マウスとヒト精子両方ともに確認されたタンパクは、すでにプロテオーム解析によってその存在が確認されているcalreticulin、HSP90の他に、nichotinic acetylcholine receptor、G-protein coupled receptor、ZFP35、cAMP response element binding proteinなどであり、今後の精子機能解明に大きく寄与すると考えられる。
またマウスをモデルとして、精子内におけるcAMPを介するシグナル伝達系の先体反応への関与を検討した。PKA刺激剤であるH8を作用させた精子を^<32>P-ATP存在下で培養すると、先体反応が誘起されるとともにオートラジオグラフィーにてリン酸化が増強される45kDのタンパクを認め、現在このタンパクを解析中である。
臨床へのアプローチとして、不妊男性患者からの検体はゲルに現れたスポットパターンから大きく3つに分けられることが明らかになった。現在、3群間で量の顕著に異なるタンパクの同定を行い、精子機能との関連を解析中である。また凍結前後のヒト精子の膜抽出タンパクのパターン比較では、4つのあきらかに凍結保存操作後に量が減少しているスポットが認められた。
一方レクチン染色により糖タンパクを検出する試みは、残念ながら現時点では明らかな結果が得られていない。今後、レクチンカラム処理後の抽出液を展開するなど、従来の転写した膜をレクチン染色するというアプローチと異なる方法の検討が必要と考えられた。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】2003 - 2004

【配分額】3,500千円 (直接経費: 3,500千円)