Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

肝細胞癌 / 進行がん / 微小環境 / 腫瘍免疫 / 転移 / 多様性 / 病理

本研究の目的は、①全ての病期（前癌病変、早期肝細胞癌から切除不能進行肝細胞癌まで）における肝細胞癌の免疫微小環境の病理学的分類の確立と、②各免疫微小環境の成立機序の一端の解明である。2021年度（４年計画の初年度）は、進行期肝細胞癌における免疫微小環境について、原発巣と転移巣の間における違いや多様性を含めて検討するため、進行期肝細胞癌の病理解剖例60例からなる研究コホートを樹立した。それぞれの症例において、原発巣に加えて代表的な転移巣数か所を含むFFPEブロックから標本を再作製し、組織学的所見の再評価を行った。また、一部の症例について多重免疫染色を用いた免疫微小環境の評価を開始した。
組織型を再評価した結果、外科切除例と比較して進行期肝細胞癌では低分化型から肉腫様の形態を示す腫瘍が有意に多いことが確認された。また、興味深いことに、これら低分化型から肉腫様の肝細胞癌の一部においてリンパ球浸潤の増加を伴う一群が認められ、進行期肝細胞癌に特徴的な腫瘍微小環境の存在が示唆された。従って、今後研究を進めることで進行期のがんの微小環境に関する興味深い結果が得られると考えられた。
また、免疫微小環境とその他の腫瘍間質構成要素との関係について検討するため、免疫微小環境と血管増生因子発現、腫瘍血管の相互関係について外科切除検体を用いて詳細な比較・検討を行った。この結果、肝細胞癌では腫瘍免疫応答と血管増生因子発現が互いに負に相関することが示され、肝細胞癌の腫瘍微小環境が４つのImmuno-vascular subtypeに分類できることが判明した。得られた成果は国際誌上に発表した（Kurebayashi et al. Hepatology 2021, Epub ahead of print）。

細胞外マトリックス / 浸潤 / 転移 / Versican / 細胞外マトリックスプロテオグリカン / Sharpin / 肝細胞癌 / 糖タンパク質 / バイオマーカー / 癌関連遺伝子

細胞外マトリックスは癌の浸潤、転移に抑制的に働く一方で、その一部には促進的に働く機能的分子が存在することが明らかになりつつある。その一つであるVersicanは肝臓癌で転移や腫瘍進展への関与が示唆されている。本研究では肝癌で高頻度に活性化が認められるWntシグナル活性下でSharpinという分子がbeta-cateninと結合することにより、共にVersicanの発現を亢進させている可能性を示し、肝癌でWntシグナルが活性化した条件下では、Sharpinが治療の標的となり得ることが示唆された。

肝細胞癌患者の生命予後は手術やラジオ波焼灼療法を中心とした局所療法による根治的治療により伸びているが、肝細胞癌の浸潤や遠隔転移は、肝細胞癌患者の予後を悪化させる主な原因の一つである。本研究では、肝細胞癌の浸潤を引き起こすと考えられている分子である細胞外マトリックスプロテオグリカンの一つVersicanに着目し、その発現調節機序と新規治療標的としての可能性を示し、本分子を標的とした治療が肝癌患者の予後改善へ寄与できる可能性が考えられた。

肝細胞がん / 浸潤転移 / 細胞運動性 / インテグリン / c-Src / Rhoキナーゼ / 遺伝子発現解析 / CO-029 / DRH1 / VDUP1 / tetraspanin / 転移 / カドヘリン / Rho

既に確立した肝内転移モデルと、LPA-Rho-p160ROCKを介した細胞運動性が肝内転移に重要な役割を果たしているという知見を基に検討を行った。高転移性肝がん細胞株KYN2はインテグリンを介した基質との接着によりカドヘリン系の不活化、細胞の分散、高い細胞運動性を示すが、このときαカテニンの減少と、c-Srcの活性化が認められた。この細胞に、c-Srcの機能抑制型遺伝子変異体を導入すると、ラフリングが消失し、stress fiberと明瞭な接着斑の形成がみられ、細胞運動能は低下した。C-Srcの活性化が、接着班のtumoverに関わっている可能性が示唆された。また、カドヘリン系、インテグリン系に細胞骨格系も合わさった複雑な相互作用が、がん細胞の運動性、そして浸潤・転移に深く関わっている事を示していると考えられた。また、別の高転移性肝がん細胞株Li7を用いたSCIDマウス肝内転移モデルにおいて、Rhoキナーゼ特異的阻害薬であるY-27632投与が肝細胞がんの肝内転移に対する治療として有効であることが示された。
異なる転移性を示す肝がん細胞株ならびに組織における遺伝子発現解析をDifferential Display法にて行い、同定された分子の浸澗・転移性への関与を、ヒトがん組織、転移モデルを用いて検討した。肝がんの非腫瘍部で高発現を示すcloneは、全長と推測されるcloneを得たが、novel geneであった。臨床パネルの検討では、門脈浸潤陽性症例、肝内転移陽性症例、低分化症例で腫瘍部の発現が有意に低下する傾向を示した。肝がんで高発現を示すcloneとして同定された4回膜貫通型蛋白tetraspaninの一つCO-029は、これまで報告されているCD9,CD82(KAI1)とは異なり、腫瘍部で高発現を示すと共に、転移を有する腫瘍で発現が亢進していた。免疫組織学的にもその傾向が確認された。転移性を示さないKIM-1細胞株に対して、CO-029遺伝子を安定的に導入し、軽度ではあるが転移性の獲得が認められ、CO-029の転移への関与が示された。

【研究分担者】
田中康雄	東京大学	医学部附属病院	助教	(Kakenデータベース)

【研究分担者】
藤井元	国立がんセンター	研究所・病理部	研究員	(Kakenデータベース)