Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

グリオーマ / 抗原 / 遺伝子 / 血清 / HSV / vector / サイトカイン / グリオーマ抗原 / ベクター

悪性腫瘍は極めて治療困難な疾患であり、現在まで有効な治療法がない。そこで申請者らは新たなアプローチとして脳腫瘍に対する腫瘍抗原特異的な免疫遺伝子治療を提案した。
本研究において、新規の脳腫瘍抗原遺伝子の単離を目的としてグリオーマ患者血清を用いてautologous typingに分子生物学的手法を取り入れたSEREX (Serological indentification of antigens by recombinant expression cloning)法による解析を試みた。
初年度において、12症例のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングし、92個の陽性クローンを単離し、塩基配列を解析した結果、これらの抗原は52種の遺伝子をコードしていることを明らかにした。更に、これら抗原を様々な患者血清中IgGとの反応を解析し、グリオーマを含むガン患者にのみ反応する新規遺伝子KU-GB-1の全長を単離した。
次年度は同様の手法を用い、更にグリオーマ患者血清にのみ反応する新規抗原KU-GB-2を同定し、KU-GB-1とともに遺伝子全長の塩基配列を決定した。
最終年度にはグリオーマ細胞株2種および精巣組織から構築したcDNAライブラリーをグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングし、陽性クローンを単離した後、塩基配列を決定し、新規のグリオーマ抗原としてKU-GB-3,KU-GB-4,KU-GB-5を同定し、それぞれ遺伝子全長の塩基配列を決定した。
これら新規の抗原遺伝子は精巣を除く正常組織において明らかな発現は認められなかったが、グリオーマにおける発現が認められた。
本研究により現在まで、グリオーマ患者においてIgG抗体反応を示す5種の新規抗原遺伝子が単離・同定され、今後、これらの抗原分子を用いた免疫治療への応用を進めていく。

グリオーマ / 脳腫瘍 / 抗原 / 遺伝子 / 血清 / 癌 / 腫瘍抗原 / クローニング / ファージベクター / SEREX

悪性脳腫瘍(グリオーマ)は極めて治療困難な疾患であり、新たな治療法の開発が強く望まれている。本研究では、グリオーマに対する新しい免疫療法の開発を目的として、癌患者血清で患者自身の癌細胞を検索する方法に、分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法によるヒトグリオーマ特異的抗原遺伝子の単離を試みた。
2種類のグリオーマ細胞株からmRNAを抽出し、cDNAを合成した後、λZAPIIファージに組み込みcDNA libraryを作製した。患者血清一人あたり5x10^5個のファージをプレーティングした後、ニトロセルロース膜にプロットし、グリオーマ患者血清(1:100希釈)と反応させて、陽性クローンを単離した。12人のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングした結果、92個の陽性クローンを単離した。塩基配列解析により、それらの抗原は52種類の遺伝子をコードしていることが明らかになった。さらに単離された抗原を、様々な患者(グリオーマ患者、他の癌患者、他の脳疾患患者、および健常人)血清中IgGとの反応を解析したところ、 2種の新規遺伝子を含む、7種の遺伝子産物はグリオーマ患者血清とのみ反応を示した。
以上、本研究ではSEREX法を用いて、グリオーマ患者血清中IgGに特異的に反応する抗原遺伝子を単離した。

【研究分担者】
肥塚靖彦	キリンビール医薬探索研究所	薬理評価グループ	主任研究員(研究職/">(Kakenデータベース)
河瀬斌	慶應義塾大学	医学部	教授	(Kakenデータベース)
河上裕	慶應義塾大学	医学部	教授	(Kakenデータベース)