【研究分野】実験動物学

【研究領域課題番号】15K06807 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

マーモセット / ノックイン / ゲノム編集 / CRISPR

【研究成果の概要】

従来、ノックイン動物を用いる際はES細胞にターゲッティングベクターを導入し、ノックインされたことにより薬剤耐性になったものを選択することにより選別する方法が採用されてきた。しかし、ES細胞の性質の違いにより、この方法はマウス以外の動物では不可能であるため、CRISPRとドナーDNAを受精卵に導入する方法が採用されている。非ヒト霊長類モデル動物であるマーモセットは、得られる受精卵の数が他の動物と比べて非常に少なく、ノックイン効率を上昇させる必要性が高い。そこで、マーモセットES細胞を用いて組換えの頻度を上昇させる遺伝子の探索を行った。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】2015-04-01 - 2018-03-31

【配分額】5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円)

【研究分野】腫瘍治療学

【研究領域課題番号】15K14404 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

CRISPR / Cas9 / ゲノム編集 / がん抗原 / 細胞傷害性T細胞 / Crispr / CRISPR/CAS9 / がん抗原特異的CTL / 抗原特異的な癌免疫細胞療法

【研究成果の概要】

マウスCD8+T細胞に、T細胞受容体を標的として、改良型SpCas9リコンビナントタンパク質/ gRNA複合体を電気穿孔法を用いて細胞内に導入し、TCR欠損CD8+T細胞を作成した。その細胞に、hgp100がん抗原特異的TCR遺伝子を導入し、hgp100がん抗原特異的CTLを作出した。この細胞は、悪性黒色腫に対して高い細胞傷害性を示した。我々は、CRISPR/Cas9ゲノム編集システムを用いて、TCR遺伝子の除去に成功した。そしてTCR欠損CD8+T細胞にがん抗原特異的TCRsを遺伝子導入することで、がん抗原特異的細胞傷害性T細胞を作成することに成功した。

【研究種目】挑戦的萌芽研究

【研究期間】2015-04-01 - 2017-03-31

【配分額】3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)

【研究分野】構造生物化学

【研究領域課題番号】26291010 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

非コードRNA / CRISPR / Cas9 / Argonaute / piRNA / ゲノム編集 / RNA / 結晶構造 / Maelstrom / Crystal structure / Ribonuclease / CRISPR-Cas9

【研究成果の概要】

カイコに由来するPIWIタンパク質（Siwi）を精製し、その結晶構造を世界で初めて解明した。その結果、SiwiがpiRNAと結合して生殖細胞を守る分子機構の一端が明らかになった。さらに、様々な細菌に由来するCas9およびCpf1の結晶構造を解明し、CRISPR-Cas酵素の多様な作動機構の理解に貢献するとともに新たなゲノム編集技術の開発基盤を確立した。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2014-04-01 - 2018-03-31

【配分額】16,640千円 (直接経費: 12,800千円、間接経費: 3,840千円)