【研究分野】水産化学

【研究領域課題番号】19380120 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

アレルゲン / エピトープ / カルシウム結合性筋形質タンパク質 / 魚貝類 / 抗体 / トロポミオシン / パラミオシン / パルブアルブミン / コラーゲン / トロボミオシン

【研究成果の概要】

パルブアルブミン(魚類の主要アレルゲン)のIgEエピトープ(IgE抗体と結合する部位でアレルギーの発症に関わる)を解析し、魚類アレルギーの免疫治療に有望な改変パルブアルブミンを作製した。トロポミオシン(甲殻類・軟体動物の主要アレルゲン)のIgEエピトープを明らかにし、さらにIgEエピトープを認識するモノクローナル抗体の確立に成功した。また、甲殻類アレルゲンとしてsarcoplasmic calcium-binding proteinを、軟体動物アレルゲンとしてパラミオシンを、それぞれ新たに同定した。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2007 - 2009

【配分額】19,630千円 (直接経費: 15,100千円、間接経費: 4,530千円)

【研究分野】水産化学

【研究領域課題番号】17380124 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

魚貝類 / アレルゲン / パルブアルブミン / トロポミオシン / コラーゲン / cDNAクローニング / 抗体 / IgE結合エピトープ / モノクローナル抗体

【研究成果の概要】

1. 4種甲殻類(ホッコクアカエビ、ケガニ、ナンキョクオキアミ、ミネフジツボ)および10種貝類(クロアワビ、サザエ、エゾボラ、アカガイ、マガキ、トリガイ、ウバガイ、ミルクイ、マテガイ、アサリ)のトロポミオシン(TM)の全一次構造をcDNAクローニングにより明らかにした。ミネフジツボTMのアミノ酸配列は特異であったが、その他の3種甲殻類のTMは既知の甲殻類TMのアミノ酸配列と90%以上の高い相同性を示した。一方、貝類TMのアミノ酸配列は甲殻類、頭足類とは著しく異なり、また貝類間でも配列相同性は科(または目)レベルでのみ高いことを認めた。
2.マサバパルブアルブミン(PA)のIgE結合能はCa^<2+>除去により著しく低下すること、Ca^<2+>結合にとって重要なAsp-51およびAsp-90をAlaに置換した改変PAのIgE結合能は天然PAより弱いことを認め、PAの主要なIgE結合エピトープはCa^<2+>結合と関連した高次構造に依存すると推定した。
3.マサバPAの一次構造上のIgE結合エピトープは21-40の領域に、ニジマスコラーゲンα2鎖のIgE結合エピトープは941-968の領域に、スルメイカトロポミオシンのIgE結合エピトープは113-132、185-204および265-284の領域に含まれることを明らかにした。
4.ブラックタイガーに20kDaの新規アレルゲンを検出し、部分アミノ酸配列分析によりsarcoplasmic calcium-binding proteinと同定した。
5.パルブアルブミンのECL-WB法による微量検出法を確立し、魚類コラーゲン製品に極少量のパルブアルブミンが混入する可能性を明らかにした。
6. 5種の10-12アミノ酸残基ペプチドをモデルとして抗体作製を検討し、魚類アレルゲンB細胞エピトープに対する特異的抗体作製法を確立した。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2005 - 2006

【配分額】14,200千円 (直接経費: 14,200千円)