Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

カルシウム / 超ラセン構造 / RNaseE / cafA / 16S rRNA / エンドリボヌクレアーゼ

1 SH3450株のカルシウム依存的増殖にかかわる遺伝子(cal)はP1トランスダクションによりargHとrpoBの間(約90分)にあることが示されたが、この領域のどのDNA断片によっても相補されず、優性変異であることが示唆された。cal変異株はDNAジャイレースの阻害剤ノボビオシンに高感受性を示し、DNAの超ラセン構造が弛緩していることが示唆された。
2 RNaseEの変異株amslの温度感受性がcafAプラスミドによって部分的に回復されること、amsl cafA::catの二重変異株ではその温度感受性が増強されることを見い出した。アルコールデヒドロゲナーゼadhEとcafA::catの二重変異株は生存可能であった。cafA::cat株では16S rRNAの前駆体である16.3 S rRNAが蓄積しており、cafAプラスミドの導入によって回復されることを見い出した。またamsl変異株では16.3Sよりやや大きめの前駆体16.5Sが蓄積していた。リファンピシンを用い新規RNA合成を止めた実験より、CafAとRNaseEはそれぞれ互いの認識部位を切断する活性を弱いながらも持っていることが示された。16S rRNAのプロセッシングの変異株として取られ、その後解析が行われていなかったBUMMER変異株がcafAの変異株であることを明かにした。これらのことよりCafAは16S rRNAの成熟過程にかかわるRNaseE様のエンドリボヌクレアーゼであることが示唆された。

大腸菌 / cafA / RNaseE / ams / mukA / カルシウム / 細胞周期

cafA遺伝子の破壊株cafA::catを構築し、その細胞分裂や染色体分配に異常がないことを落射蛍光顕微鏡により確認した。cafA遺伝子と相互作用する因子を細胞分裂変異株の中から検索した。その結果、RNaseEの変異株ams1の温度感受性がcafAプラスミドによって部分的に回復されることを見い出した。また、ams1 cafA::catの二重変異株ではその温度感受性が増強されていた。これは、CafA蛋白質がRNaseE様の活性を持つことを示唆している。さらに、mukA変異株がcafAの過剰発現により死滅することを見い出した。同様な性質を示しmukAプラスミドによって部分的に回復するM21株を新たに分離した。
大腸菌の細胞周期におけるカルシウムの役割を明らかにするために、培地中のカルシウムに対して異常な反応を示す変異株を探索した。その結果、カルシウム感受性を示すCS2-29株、カルシウム依存性を示すSH3450株を分離した。CS2-29株のカルシウム感受性にかかわる変異を相補する遺伝子を、コスミドクローンを用いてクローン化した。クローン化した遺伝子をプローブとしてKoharaの大腸菌染色体整列クローンに対してハイブリダイゼーションを行うことによってマッピングした。同様に、SH3450株のカルシウム依存的増殖にかかわる遺伝子について、クローン化、マッピングを行なった。今後、得られた遺伝子の構造決定、遺伝子産物の同定を行なう予定である。さらにカルシウムに関する変異株を探索し、いくつかの候補株を得た。