Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

ヒストン様蛋白質 / H-NS / 細胞周期 / カルシウム / 細胞骨格様蛋白質 / cafA / ams / rRNA / アルコールデヒドロゲナーゼ / oriC / DNA gyrase / 超ラセン構造 / 大腸菌

1 大腸菌のoriC-膜複合体中にヒストン様蛋白質H-NSを抗H-NS抗体を用いて検出した。さらにその欠失変異体は、野性株と比べて高頻度に無核細胞を放出し、細胞あたりの核数(ploidy)が減少していることを見い出した。これはH-NSが染色体の複製と分配において重要な役割を果たしていることを示唆している。
2 大腸菌の細胞周期におけるカルシウムの役割を明らかにするために、培地中の高濃度のカルシウムによって生育が阻害される変異株CS2-29と、高温感受性が抑制される株SH3450を分離し、その解析を行った。CS2-29株のカルシウム感受性にかかわる変異を相補する遺伝子を、コスミドベクターを用いてクローン化した。得られたクローンは大腸菌染色体地図上48分にマップされた。同様に、SH3450株のカルシウム依存的増殖にかかわる遺伝子についてコスミドクローンを分離した。得られたクローンは90分にマップされた。現在、これらのクローンからカルシウムに関わる遺伝子のサブクローニングを行っている。
3 過剰発現により細胞内に細胞骨格様構造体を形成するcafA遺伝子の機能を明らかにするためにcafA遺伝子の破壊株cafA::catを構築した。RNaseEの変異株ams1の温度感受性がcafAプラスミドによって部分的に回復されること、ams1 cafA::catの二重変異株ではその温度感受性が増強されることを見い出した。cafA::cat株では16S rRNAの前駆体である16.3S rRNAが蓄積しており、cafAプラスミドの導入によって回復されることを見い出した。これらのことよりcafAは16S rRNAの成熟過程にかかわるRNaseE様のエンドリボヌクレアーゼであることが示唆された。

大腸菌 / 染色体複製 / 細胞分裂 / oriC / Fプラスミド / SopA / mre / H-NS / oric / sopA / DNAー膜複合体 / HーNS

染色体の複製開始を同調化した大腸菌を用いて、複製開始直後の菌体よりoric-複合体を調製し、その構成成分を分析した。その結果、Hendricksonらによって見い出されていた35K,55K,75Kの蛋白質は、グリコーゲン顆粒由来のものであり、oric-複合体形成には関係のないことが判明した(J.Bacteriol.1992,174:5454-5456)。新たにoric-複合体の構成成分として、ヒストン様蛋白質として知られるH-NS蛋白質とSDS-PAGE上で17Kの位置に泳動される成分を見い出した。H-NSの変異株では染色体複製に異常があり、核数の減少や無核細胞の放出が観察された。17Kの成分はRNAであることが示唆された。
DNA分配のモデル系としてFプラスミドのSopABC遺伝子の解析を行ない、SopA蛋白質がATPase活性を持つこと、その活性がDNAとSopB蛋白質によって活性化されることを見い出した(Mol.Gen.Genet.1992,234:346-352)。
細胞分裂の制御を行なうmre遺伝子群の解析を行ない、mreBCDの変異株中ではペニシリン結合蛋白質をはじめとして様々な蛋白質の発現が異常になっていることを見い出した(J.Gen.Appl.Microbiol.1992,38:157-163)。mreB遺伝子の破壊株を構築し、mreCDの発現にmreBの発現が必要なことがわかった。mre遺伝子群の下流に存在するcafA遺伝子を過剰発現させると、細胞内に繊維状構造体が形成されることが、電子顕微鏡により観察された。cafA遺伝子の機能を明らかにするために、その破壊株を構築した。

【研究分担者】
和地正明	東京工業大学	生命理工学部	講師	(Kakenデータベース)

【研究分担者】
和地正明	東京工業大学	生命理工学部	助手	(Kakenデータベース)